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小鼠腦腸肽elisa檢測(cè)試劑盒樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
點(diǎn)擊次數(shù):557 更新時(shí)間:2022-05-24

小鼠腦腸肽elisa檢測(cè)試劑盒樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:

ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

(1)血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

(2)血漿:

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

(3)尿液:

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:

檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。

(5)培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

(6)組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

結(jié)果計(jì)算與判斷


1. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。


2. 以標(biāo)準(zhǔn)品500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、0 ng/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。


3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)AMA含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。


試劑盒性能


  1.   靈敏度:最小的AMA 檢測(cè)濃度小于4ng/ml。


2. 特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的小鼠AMA。不與小鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。


3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于11%。


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