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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

人腦動脈血管內(nèi)皮分離自腦動脈組織；腦動脈有成對的頸內(nèi)動脈和椎動脈互相銜接成動脈循環(huán)；靜脈系多不與同名動脈拌行，所收集的靜脈血先進入靜脈竇再匯入頸內(nèi)靜脈；各級靜脈都沒有瓣膜，它包括腦的動脈系統(tǒng)和腦的靜脈系統(tǒng)。腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞主要功能：①維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡；②合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)；③維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡。

方法簡介：

公司實驗室分離的人腦動脈血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人腦動脈血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠組胺H3受體(HRH3)檢測試劑盒 ，英文名： HRH3 ELISA Kit

Mouse ai sperm aibody (AsAb) ELISA Kit 小鼠抗抗體(AsAb)檢測試劑盒

Mouse8-Hydroxy-desoxyguanosine,8-OHdGELISAKit 小鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanlymphocytefactorELISAKit人淋巴細(xì)胞因子

土壤(lithium)化學(xué)比色法定量檢測試劑盒50次

ELISAKitdsDNA大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體

SERPIND1重組小鼠 SerpinD1 / HCII 蛋白 Protein

CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/轉(zhuǎn)化生長因子β受體抗原 0.5mgCD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/轉(zhuǎn)化生長因子β受體抗原

SRC重組人 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

HAGH Protein Human 重組人 HAGH / GLO2 / Glyoxalase II 蛋白

IL7 Protein Rat 重組大鼠 IL7 / interleukin 7 蛋白

CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/轉(zhuǎn)化生長因子β受體抗原 0.5mgCD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/轉(zhuǎn)化生長因子β受體抗原

HAGH Protein Human 重組人 HAGH / GLO2 / Glyoxalase II 蛋白

SERPIND1重組小鼠 SerpinD1 / HCII 蛋白 Protein

IL7 Protein Rat 重組大鼠 IL7 / interleukin 7 蛋白

SRC重組人 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)檢測試劑盒

Humanplacealprotein,PPELISAKit 人胎盤蛋白(PP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumancicaicialPemphigoid,CP檢測試劑盒人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組(leucine)含量比色法定量檢測試劑盒20次

humanS100calciumbindingproteinA9/calgranulinB,S100A9ELISAKit人S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔(NO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔補體蛋白3(C3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔p物質(zhì)(SP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T