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細胞簡介：

兔腎小球內(nèi)皮分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球內(nèi)皮細胞是一類特殊微血管類型的細胞。細胞為圓形、多角形，單層貼壁生長；細胞質(zhì)豐富，細胞核為圓形或卵圓形。腎小球內(nèi)皮細胞被覆于腎小球毛細血管壁腔側(cè)，與血流直接接觸，是腎小球濾過膜的道屏障，可粘附細菌和白細胞，修復(fù)基底膜，并有抗凝、抗血栓的作用；所以，體外培養(yǎng)的腎小球內(nèi)皮細胞在免疫學(xué)和病理生理學(xué)領(lǐng)域中具有重要的研究價值。

方法簡介：

實驗室分離的兔腎小球內(nèi)皮采用先機械研磨過不銹鋼網(wǎng)篩分離得到腎小球、后用膠原酶消化，結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔腎小球內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔腎小球內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔I型膠原(rabbit Collagen I)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔II型膠原(rabbit Collagen II)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔II型膠原C端肽(rabbit CTX-II)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔D2聚體(rabbit 2-Dimer)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ) ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat plasminogen activator inhibitor (PAI) ELISA Kit 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)試劑盒

Humanadrenomedullin,ADMELISAKit 人腎上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 96T/48T 進口分裝

humancoicoopieleasinghormone,CRH試劑盒人促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織CHK2激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanproteinphosphatase1regulatorysubunitA,PPP1R1AELISAKit人蛋酸酶1調(diào)控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)試劑盒規(guī)格：96T/48T

S100A6重組小鼠 S100A6 蛋白 Protein

CD7 CD7抗原 0.5mgCD7 CD7抗原

HIST2H2BE重組人 Histone cluster 2 H2BE / HIST2H2BE 蛋白 Protein

IDH1 Protein Human 重組人 IDH1 蛋白

IGFBP4 Protein Mouse 重組小鼠 IGFBP4 蛋白

CD7 CD7抗原 0.5mgCD7 CD7抗原

IDH1 Protein Human 重組人 IDH1 蛋白

S100A6重組小鼠 S100A6 蛋白 Protein

IGFBP4 Protein Mouse 重組小鼠 IGFBP4 蛋白

HIST2H2BE重組人 Histone cluster 2 H2BE / HIST2H2BE 蛋白 Protein

兔腎小球內(nèi)皮細胞大鼠結(jié)合珠蛋白(Hpt)試劑盒 ，英文名： Hpt ELISA Kit

Mouse adiponectin (ADP) ELISA Kit 小鼠脂聯(lián)素(ADP)試劑盒

Ratthrombospondin1,TSP-1ELISAKit 大鼠血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFlt3ELISAKit大鼠FMS樣酪激酶3

細胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)總活性熒光定量試劑盒20次

Ratoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)試劑盒規(guī)格：96T/48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。