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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔胚胎羊膜分離自羊膜組織；羊膜為單層上皮細胞互相連接構(gòu)成的薄膜。單層上皮細胞具有分泌羊水的作用。隨著胚胎的生長發(fā)育，羊膜與絨毛密切緊貼，形成胎膜。胎膜隨著羊膜腔逐漸擴大而呈半透明的薄膜，無血管，富有韌性（胎膜也就是羊膜腔的囊壁）。羊膜腔內(nèi)充滿的液體為羊水。羊膜僅覆蓋在胎盤的兒體面，并不深入胎盤組織中，隨著妊娠的進展羊膜腔逐漸擴大，占據(jù)整個子宮腔，羊膜是胎膜內(nèi)一層，是一層半透明的薄膜，與覆蓋在胎盤、臍帶的羊膜層相連接。羊膜是胎盤的內(nèi)層，與人眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，含有眼表上皮細胞，包括結(jié)膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質(zhì)，其光滑，無血管、神經(jīng)及淋巴，具有一定的彈性，厚0.02~0.5mm，在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元，主要為i、iii、iv、v、vii型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份，正是這些成份使羊膜可以充當“移植的基底膜"而發(fā)揮一種新的健康合適的基質(zhì)。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質(zhì)細胞組成，均具有多分化潛能，可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元，且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能。

方法簡介：

公司實驗室分離的兔羊膜胚胎采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的兔羊膜胚胎經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬肝細胞生長因子(HGF)ELISA 試劑盒

Human Ureaplasma urealyticum aibody (UU-Ab) ELISA Kit 人解脲脲原體抗體(UU-Ab)檢測試劑盒

PorcineEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 豬內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAlpha-bungarotoxin,Alpha-BGTELISAKitα-銀環(huán)蛇毒素

血液賴(lysine)含量化學比色法定量檢測試劑盒20次

NudeMouseProteinPhosphatase,PPELISAKit裸鼠蛋酸酶(PP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

FZD5重組人 Frizzled-5 / FZD5 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

神經(jīng)生長因子(NGF)重組蛋白 Recombinant Nerve Growth Factor (NGF)

TRIP10重組人 TRIP10 / Cip4 蛋白 Protein

IL3RA Protein Human 重組人 IL3RA / CD123 蛋白

HA Protein Influenza 重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

神經(jīng)生長因子(NGF)重組蛋白 Recombinant Nerve Growth Factor (NGF)

IL3RA Protein Human 重組人 IL3RA / CD123 蛋白

FZD5重組人 Frizzled-5 / FZD5 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

HA Protein Influenza 重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

TRIP10重組人 TRIP10 / Cip4 蛋白 Protein

豚鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)檢測試劑盒 ，英文名： ACTH ELISA Kit

Many people immunoglobulin receptor (poly-IgR) ELISA Kit 人多免疫球蛋白受體(poly-IgR)檢測試劑盒

rabbitN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-HexA(MouseBeta-hexosaminidaseA)ELISAKit小鼠β氨基己糖苷酶A

細菌細胞色素氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

rabbitHyaluronicacid,HAELISAKit兔子透明質(zhì)酸(HA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔羊膜胚胎細胞人重去甲上腺素(NE-B)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人血管生長因子(TAF)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人相關抗原(TAA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人特異性抗原(TSA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝